Petit-fils de François de l'Hospîtal, fils de Louis Gallucio de L'Hospital, Nicolas de L'Hospital devint capitaine des gardes sous le règne de Louis XIII.
A ce titre, il participa à la conjuration qui devait mettre à mort Concino Concini, le protégé de la régente et mère de Louis XIII, Marie de Médicis.

C'est lui-même qui reçut l'ordre de tuer le maréchal d'Ancre le 24 avril 1617.

Après cette exécution il fut promu maréchal de France.
Il fut pourtant enfermé à la Bastille quelque années plus tard sur ordre de Richelieu, pour des violences exercées sur l'archevêque de Sourdis.

Il fut libéré le 19 janvier 1643, et mourut à Nandy près de Melun en 1644.